提取動物關節(jié)軟骨組織總RNA

實驗目的

       研磨破碎軟骨組織（大鼠膝關節(jié)軟骨），提取其總RNA。

實驗原理

       充分磨碎軟骨樣品（大鼠膝關節(jié)軟骨），再用相關試劑提取其總RNA。

實驗材料和器具

樣品：大鼠膝關節(jié)軟骨

儀器：多樣品組織研磨儀（上海凈信，Tissuelyser-24）

耗材：研磨罐（上海凈信，***ml），研磨珠（上海凈信，***mm，***顆）

試劑：液氮若干

實驗步驟

1.研磨軟骨組織

1.1 取適量大鼠膝關節(jié)軟骨組織，剪切成約***立方厘米小塊；

1.2 將小塊軟骨組織置于液氮中***分鐘或放入***度冰箱冷凍30分鐘；

1.3 將樣品和研磨珠放入研磨罐中，蓋好蓋子；

1.4 將裝好樣品及鋼珠的研磨管，放入已經(jīng)在***度冰箱預冷好的適配器中，加入變性液，β-巰基乙醇；

1.5 將適配器放入凈信研磨儀中，在***hz條件下，研磨***min，可得到勻漿狀的軟骨組織；

2.總RNA提取

2.1 冰水浴下，加酸性水飽和酚，搖勻，加醋酸鈉，異戊醇混合液，冰水浴上***min；

2.2 ***℃下，離心，取上清液，加異戊醇混合液，離心取上清，加異丙醇，***℃下沉淀，離心，得到凝膠狀RNA和蛋白多糖混合沉淀，加無RNA酶水，溶解得膠狀溶液；

2.3 取膠狀溶液用plant RNAout試劑盒的RNA提取步驟得到總RNA沉淀，取沉淀，乙醇洗滌后用無RNA酶水溶解沉淀，即得關節(jié)軟骨組織總RNA溶液。

實驗結(jié)果

       采用本實驗方法提取的動物關節(jié)軟骨組織總RNA的收率高，并且純度高、質(zhì)量、完整性好，可以滿足分子生物學研究應用。

                     總RNA甲醛變性膠電泳結(jié)果

          Ⅱ型膠原PCR擴增產(chǎn)物電泳結(jié)果